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    維生素AElisa試劑盒實驗中蛋白質的分離純化

    點擊次數:324次 發布時間:2018-02-28

    維生素AElisa試劑盒實驗由于各種蛋白質分子顆粒巨細、親水程度不同,故鹽析所需的鹽濃度也不一樣,因此調理混合蛋白質溶液中的中性鹽濃度可使各種蛋白質分段沉積。
    影響鹽析的要素有:
    溫度:除對溫度靈敏的蛋白質在低溫(4度)操作外,通常可在室溫中進行。
    蛋白質鹽析常用的中性鹽,主要有硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、氯化鈉、磷酸鈉等。
    通常溫度低蛋白質溶介度下降。但有的蛋白質(如血紅蛋白、肌紅蛋白、清蛋白)在較高的溫度(25度)比0度時溶解度低,更簡單鹽析。
    pH值:大多數蛋白質在等電點時在濃鹽溶液中的溶介度zui低。
    ELISA試劑盒實驗鹽析前血清要加等量生理鹽水稀釋,使蛋白質含量在2.5-3.0%。
    蛋白質濃度:蛋白質濃度高時,欲別離的蛋白質常常夾雜著別的蛋白質地一同沉積出來(共沉現象)。
    其中使用zui多的硫酸銨,它的長處是溫度系數小而溶解度大(25度時飽滿溶液為4.1M,即767克/升;0度時飽滿溶解度為3.9M,即676克/升),在這一溶解度范圍內,很多蛋白質和酶都可以鹽析出來;
    硫酸銨分段鹽析作用也比別的鹽好,不易導致蛋白質變性。硫酸銨溶液的pH常在4.5-5.5之間,當用別的pH值進行鹽析時,需用硫酸或氨水調理。
    維生素AElisa試劑盒蛋白質在用鹽析沉積別離后,需要將蛋白質中的鹽除掉,常用的方法是透析,即把蛋白質溶液裝入秀析袋內(常用的是玻璃紙),用緩沖液進行透析,并不斷的替換緩沖液,因透析所需時刻較長,所以在低溫中進行。
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