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    檢測胱抑素CElisa試劑盒標本時要注意的事情

    點擊次數:186次 發布時間:2019-11-13

       在檢測胱抑素CElisa試劑盒標本時,需要仔細認真,在遇到問題時冷靜對待。總結了以下幾點需要注意:

      1、本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染,菌體中可能含有內源性HRP,也會產生假陽性反應。
      保存過久可發生聚合在ELISA中可使本底加深。
      2、凍結標本溶解后,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛倒混合,不要在混勻器上強烈震蕩。
      3、渾濁或有沉淀的標本應先離心或過濾,澄清后再檢測。
      4、反復凍融會使蛋白效價降低,所以代測樣本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。
      ELISA實驗標準曲線平直,一般有以下原因:標準曲線制備是否不當,洗孔不凈,吸孔不充分,讀數不準確或是吸量誤差。查找原因,即可找到相應解決方案。
      檢測目的是為實驗提供準確可靠定量分析實驗依據。為保證實驗數據的可靠性,在實驗過程中必須堅持全面質量控制和全過程質量控制。
      胱抑素CElisa試劑盒操作步驟
      1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
      2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內。
      3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
      4. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
      5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
      6. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
      7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
      8. 取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
      9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。
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