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    PCR試劑盒特點和使用方法

    點擊次數:123次 發布時間:2020-06-17

       PCR試劑盒特點和使用方法

      熒光定量PCR技術是通過熒光染料或熒光標記的特異性探針,對PCR產物進行標記跟蹤,實時監控反應過程。隨著PCR反應的進行,反應產物不斷累積,熒光信號強度也等比例增加。每經過一個循環,收集一次熒光強度信號,這樣就可以通過熒光強度變化監測產物量的變化,結合相應的軟件對產物進行分析,可以得到熒光擴增曲線,計算待測樣品初始模版的量。實時熒光定量PCR技術是一次由定性技術向定量技術的飛躍,運用該項技術,可以對DNA、RNA樣品進行相對定量、定量和定性分析。
      PCR試劑盒產品及特點:
      1.即開即用,用戶只需要提供腸賈第蟲樣品。
      2.根據腸賈第蟲保守序列設計的專一性引物,與相關病毒無交叉反應。
      3.靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
      4.一管式熒光定量PCR檢測,避免后續污染。
      5.PCR試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
      PCR試劑盒使用方法:
      一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)
      1.注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
      2.標記6個離心管
      3.用帶芯槍頭分別加入45μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
      4.在7號管中加入5μL1×10E8拷貝/μL的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
      5.換槍頭,在6號管中加入5μL1×10E7拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
      6.換槍頭,在5號管中加入5μL1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
      7.重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
      二、樣品DNA的制備
      8.如果有N個樣品,必須設置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4拷貝/μL,10μL相當于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5拷貝/μL,10μL相當于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
      9.用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒DNA提取試劑盒兼容。
      三、設置qPCR反應(20μL體系,在樣品制備室進行)
      10.如果只做1次重復,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復,則反應設置數量相應增加2或3倍。
      11.在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加。
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